悬浮细胞ChIPChromatinImmuno Precipitation(ChIP) protocol
对于悬浮细胞 1) 室温300×g离心10min收集悬浮的细胞; 2) 弃上清; 3) 使用42.5 ml新鲜的无血清培养液彻底重悬细胞。吹打混匀以打散细胞团; 4) 一次性快速加入1.25ml的37%甲醛溶液,进行染色体的交联反应。甲醛终浓度为1%,颠倒混匀数次; 5) 室温精确孵育10min,每1-2min轻柔颠倒混匀; 6) 一次性快速加入5ml的2.5M甘氨酸,终止交联,混匀; 7) 室温孵育5min,然后置于冰上至少15min以彻底中止反应; 8) 将细胞混匀然后按25×106每份分离细胞; 9) 800×g离心10 min,收集交联的细胞; (800g离心不下来的话,可以用更高速离心1min) 10) 吸去上清,需要尽可能干净的去除上清液; 11) 制备完成的细胞可以直接用于下步裂解。 (用液氮速冻并置于-80°C储存可以至少1.5年) 如需开展后续的项目务必使用干冰冷链物流运输至云生物实验室。 |