荧光原位杂交技术研究CNV

　　荧光原位杂交技术(fluorescence in situ hybridization, FISH)，是一种非放射性分子遗传学实验技术，其基本原理是将直接与荧光素结合的寡聚核苷酸探针或采用间接法用生物素、地高辛等标记的寡聚核苷酸探针与变性后的染色体、细胞或组织中的核酸按照碱基互补配对原则进行杂交，经变性、退火、复性、洗涤后即可形成靶DNA 与核酸探针的杂交体，直接检测或通过免疫荧光系统检测，最后在荧光显微镜下显影，即可对染色体结构变异进行分析。可用于拷贝数变异等染色体结构变异的验证。目前已广泛应用于细胞遗传学、肿瘤生物学、基因定位、基因作图、基因扩增，产前诊断及哺乳动物染色体进化研究等领域。

FISH技术有以下几点优势：

1.安全、快速、灵敏度高；

2.探针能较长时间保存；

3.多色标记，简单直观；

4.可用于中期染色体及间期细胞的分析；

5.可应用于新鲜、冷冻或石蜡包埋标本以及穿刺物和脱落细胞等多种物质的检测。

FISH技术有以下几点劣势：

1.分辨率低，只能检测已知位点，通量较小，一次最多只能检测5-8个位点；

2.不能检测杂合性缺失（LOH）/单亲二倍型（UPD）；

3.FFPE失败率高达 15-20%；

4.定制进口探针，价格昂贵。

应用案例：

图1：三个正常人的1号染色体BAC RP11-259N12位点的多态性这里显示的是a:缺失，b:正常，c:重复Nature genetics, 2004, 36(9): 949-951.