样品要求

· 样品类型

细胞、新鲜组织或DNA样品

· 样品量

细胞样品请提供至少1×10⁶个细胞，组织样品请提供至少100mg的组织块或切片，DNA样品请提供1 μg以上的DNA

· 样品质量

基因组DNA无明显降解，主带清晰，大于23Kb，无明显弥散。OD260/280值在1.8～2.0之间，浓度 ≥ 50ng/μl

· 样品保存

细胞样品或新鲜组织块（切成～50mg的小块）可液氮冻存后，-80℃保存。DNA样品可溶于乙醇或超纯水中，-80℃保存。样品保存期间避免反复冻融

· 样品运输

样品置于1.5 ml冻存管中，封口膜封好，干冰运输

系统用途：

多用途遗传分析系统，可应用于各种遗传多态性标记的分析检测，如SNP、突变、插入/缺失、甲基化、基因拷贝数等；等位频率分析；此外，还可应用于各种微生物的鉴定、分型、耐药性评估，并可对多种亚型或野生株及突变株、耐药株组成的复杂群体中的各个组分含量直接加以定量评估。

服务项目：

1.SNP分型检测

优势：

• ◇ 单一位点的质量评估和序列信息

• ◇ 分析含有CpG位点的SNP

• ◇ 序列信息中不同位点的频率计算

• ◇ 适用于新鲜冷冻，和石蜡包埋的样本

• ◇ 不同的应用实验可同时在一次运行中实现

• ◇ PCR反应之后，1个小时内可同时平行分析96个样本

2.甲基化检测服务

基本流程 在表观遗传学的DNA甲基化研究中，新一代的测序方法可得到大量的全基因组甲基化特征数据，需要验证其中特定靶序列与表观遗传修饰的生理相关性。此验证过程较具挑战性，因为甲基化位点的位置和频率的微小改变也会带来明显的变化。焦磷酸测序可在一次检测中快速定量一个或多个甲基化位点，是理想的验证方法。因此该技术在表观遗传学研究中逐渐成为数据分析的金标准。 设计甲基化分析反应体系往往十分复杂，因为在非CpG位点胞嘧啶转化为胸腺嘧啶会影响引物的结合。为了解决这个问题，QIAGEN最近研发出了针对特定基因的预设计PyroMark CpG Assays，可覆盖整个人类基因组。这些试剂盒可用于CpG甲基化分析，并扩展了靶序列和CpG岛的选择范围。

优势：

• ◇ Pyrosequencing 能测定邻近CpG区域的单个甲基化水平，甚至包括测序的引物区域

• ◇ 启动子序列中接近的不同CpG岛的甲基化频率计算

• ◇ 适用于新鲜冷冻，和石蜡包埋的样本

• ◇ 不同的应用实验可同时在一次运行中实现

• ◇ PCR反应之后，1个小时内可同时平行分析96个样本

检测原理

引物设计

结果展示

1 材料

1.1试剂与试剂盒

1.2仪器

2方法

2.1DNA抽提

2.1甲基化修饰

2.2 纯化亚硫酸盐修饰的DNA

2.3 甲基化PCR

2.4 Pyrosequencing检测