样本准备方法

1.临床组织

a）首先准备好用于包装样本冷冻保存管，并且用油性记号笔在冻存管外表多处写明样品编号；

b）准备切除所需组织后，立即剔除非研究所需的组织，并将组织分割成小块；

c）用镊子夹住样本，放入液氮中冷却样本；

d）放入准备好的冷冻保存管中，迅速投入液氮冷却。然后转入-80摄氏度冰箱中保存。

2.动物组织

a）首先准备好用于包装样本冷冻保存管，并且用油性记号笔在冻存管外表多处写明样品编号；

b）准备切除所需组织后，立即剔除结蹄组织和脂肪组织等非研究所需的组织，并将组织分割成小块；

c）在生理盐水或PBS中迅速漂洗样本，以去除血渍和污物；

d）用镊子夹住样本，放入液氮中冷却样本；

e）放入准备好的冷冻保存管中，迅速投入液氮冷却。然后转入-80摄氏度冰箱中保存。

3.植物组织

a）准确取得所需组织后，立即用准备好的铝箔包裹组织；

b）立即投入液氮冷冻；然后转入-80摄氏度冰箱中保存。

4.血液样本

4.1白细胞分离

在血液样品中加入3倍体积红细胞裂解液（例如300ul血液加入900ul红细胞裂解液），颠倒混匀，室温放置5min，期间再颠倒混匀几次，10000rpm离心1min（若是离心机最高转速不允许，可以3000rpm离心5min），吸去上清，留下白细胞沉淀。分离白细胞后，加入适量的trizol试剂，投入液氮冷冻，然后于液氮中存放或转入-80摄氏度冰箱保存。

4.2全血

a）采用BD的PAXgene管抽取全血；

b）采血以后，颠倒混匀8-10次；

c）4摄氏度过夜后转入-20摄氏度或-80摄氏度冰箱中保存。

4.3血清

a）将血管内抽出的血液放入试管中，不加入抗凝剂；

b）室温（22-25摄氏度）放置30-60min血液标本自行凝结；

c）凝血块周围所析出的淡黄色液体即为血清，小心吸取到收集管中，100ul分装，置于-80摄氏度保存备用。

4.4血浆

a）采集外周血（采血时间一般为早晨或上午），迅速转入EDTA抗凝管中，涡旋或用移液器Tip混匀；

b）在1小时（室温条件下）或2小时（4摄氏度条件下）内进行下面的操作，4摄氏度，820g（9400rpm）离心10min；

c）吸取约1mL上清转至洁净的1.5mL离心管中，16000g（13200rpm），4摄氏度，离心10分钟，小心吸取上清到新的离心管中；

d）放入-80摄氏度冰箱中保存。

5.细胞样品

贴壁细胞或悬浮培养细胞，收集约1*10⁷个细胞。常温PBS洗涤3次，低速离心沉淀细胞，弃去PBS（尽量去除干净），放置液氮或-80摄氏度冰箱速冻，干冰运输。

6.显微切割细胞

激光显微切割获得的样品收集在专用收集盖内，加入裂解液（Invitrogen，12204），42摄氏度温浴30min，-80摄氏度保存。

7.细胞培养上清

根据实验目的，细胞培养一段时间后，贴壁细胞直接收集细胞培养上清，悬浮细胞离心去细胞团后收集上清液。为避免细胞培养基中血清的影响，细胞培养上清收集前24hr，**置换为不含血清的培养基。

8.动物体液样本（唾液、尿液、骨髓等）

在获取后，立即放入进口冻存管中，投入液氮冷冻，然后于液氮中存放或转入-80超低温冰箱保存。

9.石蜡样本

10片以上10umPET切片或石蜡块。

10.微生物样本

a）在培养基中培养单一的菌种，4摄氏度离心沉淀菌体；

b）弃上清，加PBS（RNase free）重悬；

c）离心，弃上清；

d）立即转入液氮中冷冻2h，后可置于液氮或-80摄氏度冰箱中保存，干冰运输。