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简介 基因的功能性缺失,是寻找与表型相关特定基因靶点的重要方法。CRISPR/Cas9可以通过特定的sgRNA高特异性地靶向目的DNA序列,造成指定位点的DNA双链断裂,从而引入Indel(Shortinsert/deletion)突变,导致目的基因的功能完全缺失。近年来对CRISPR/Cas9系统的优化和改进,使得基因敲除的效率和特异性进一步提高,在某些领域已经逐步取代传统的RNAi技术。 公司在最新的CRISPR/Cas9技术基础上开发了一套Quick-KO系统,能够高效、快速并且低成本地实现细胞的基因敲除,针对几十到几百个目的潜在靶点基因进行筛选,能够在2~3个月内完成批量的单基因敲除细胞株的构建,较全基因组文库筛选,可有效缩小范围,提高研究效率。 方法 客户提供潜在靶点基因清单,派致根据目的基因设计sgRNA,通过Quick-KO平台进行基因敲除细胞系构建,在敲除株的基础上进行功能筛选,通过抗性分析或者marker基因报告系统进行筛选结果的分析。 步骤 1. 明确筛选细胞和靶点清单 2. 设计sgRNA 3. 对目的细胞进行检测(支原体检测,单克隆形成率检测,转染效率检测) 4. Quick-KO系统进行单克隆敲除株构建 5. 药物筛选 6. 细胞活性分析 7. 撰写基因筛选报告 后续可进行实验 1. 针对筛选的基因敲除细胞株进行裸鼠成瘤(CDX)模型建立 2. CDX小鼠目的药物的治疗 3. 检测肿瘤生长状况,在体评估筛选到的目的基因。 1、速度快:最快8周获得F0代阳性鼠。 2、效率高:F0代100%功能性完全敲除。 3、数量多:可提供至少8只功能性完全敲除小鼠供基因初筛。 1、sgRNA设计和筛选。 2、小鼠受精卵显微注射和胚胎移植。 3、F0代小鼠繁殖。 4、小鼠鉴定。 |