组织芯片使用指南组织芯片使用指南 一、产品规格：
二、使用前准备：使用前将组织芯片放于玻片架上，如下图所示：标签栏朝上与水平成一倾斜角度，60℃左右烘烤2~3小时将表面封蜡融掉。（可根据实际情况延长融蜡时间）。
组织芯片使用——免疫组化试验操作步骤 一、仪器设备 1. 18cm不锈钢高压锅和电炉 2. 医用微波炉 3. 水浴箱 4. 冰箱-18℃-4℃ 5. 湿盒 6. 耐高温塑料切片架 7. 可调微量移液器 8. 定时器 9. pH计 二、试剂 1. PBS（磷酸盐缓冲液pH7.2~7.4）NaCl 137mmol/LKCl 2.7mmol/LNa2HPO4 4.3mmol/LKH2PO4 1.4mmol/L 2. 柠檬酸盐缓冲液CBpH6.00.01mol/L1000ml配制柠檬酸三钠 3g柠 檬酸 0.4g 3. 酶消化液 a0.1%胰蛋白酶液用0.1%CaCl2(pH7.8) 配制 b0.4%胃蛋白酶液用0.1N的HCl配制 三、操作流程 1 脱蜡和水化 脱蜡前将组织芯片放在60恒温箱中烘烤30分钟 1) 置于二甲苯I中浸泡10分钟，在二甲苯II中浸泡10分钟，在二甲苯III中浸泡10分钟，在二甲苯Ⅳ中浸泡10分钟； 2) 无水乙醇I中浸泡5分钟在无水乙醇II中再浸泡5分钟； 3) 95%乙醇中浸泡5分钟； 4) 85%乙醇中浸泡5分钟； 5) 70%乙醇中浸泡5分钟； 6) 蒸馏水中浸泡5分钟； 2 抗原修复 用于福尔马林固定的石蜡包埋组织芯片 1） 抗原热修复 a) 高温高压热修复 取一定量的0.01M柠檬酸盐缓冲液pH6.0于压力锅中大火加热至沸腾，将脱蜡水化后的组织芯片置于耐高温塑料切片架上，放入已沸腾的缓冲液中，盖上锅盖扣上压力阀继续加热至喷气，从喷气开始计时1-2分钟后压力锅离开热源，冷却至室温，取出玻片，先用蒸馏水洗两次后，用PBS洗5分钟。 b) 微波热修复 取一定量的0.01M柠檬酸盐缓冲液pH6.0于微波盒中微波加热至沸腾，将脱蜡水化后的组织芯片置于耐高温塑料切片架上，放入已沸腾的缓冲液中中，高档继续处理10-15分钟，取出微波盒冷却至室温，取出玻片先用蒸馏水洗两次，后用PBS洗5分钟。 2） 酶消化方法 常用0.1%胰蛋白酶和0.4%胃蛋白酶，使用前酶预热至37°，切片也预热至37°，消化时间为10-30分钟。 3免疫组织化学染色 SP法 1) 脱蜡水化； 2) 蒸馏水中5分钟； 3) 用蒸馏水或PBS配置新鲜的3%H2O2室温封闭10分钟蒸馏水洗1次； 4) 抗原修复； 5) PBS洗5分钟； 6) 滴加正常山羊血清封闭液,室温10分钟； 7) 甩去多余液体滴加一抗37℃1小时或者4℃过夜，4℃过夜后在37℃复温45分钟； 8) PBS洗2次各5分钟； 9) 滴加生物素化二抗孵育条件参见所用试剂盒； 10) PBS洗2次各5分钟； 11) 滴加HRP标记的链球菌亲和素孵育条件参见所用试剂盒； 12) PBS洗2次各5分钟； 13) DAB显色5-10分钟在显微镜下掌握染色程度； 14) 蒸馏水洗终止染色，苏木素复染，盐酸酒精分化； 15) 脱水透明封片镜检；
SABC法 1) 脱蜡水化； 2) 蒸馏水中5分钟； 3) 用蒸馏水或PBS配置新鲜的3%H2O2室温封闭510分钟蒸馏水洗1次； 4) 抗原修复； 5) PBS洗5分钟； 6) 滴加正常山羊血清封闭液室温10-20分钟甩去多余液体； 7) 滴加抗,37℃1小时或者4℃过夜，4℃过夜后在37℃复温30分钟； 8) PBS洗2次每次5分钟； 9) 滴加生物素化二抗孵育条件参见所用试剂盒； 10) PBS洗2次每次5分钟； 11) 滴加试剂SABC孵育条件参见所用试剂盒； 12) PBS洗2次每次5分钟； 13) DAB显色DAB显色试剂盒或者自配显色剂显色镜下掌握显色程度； 14) 蒸馏水洗终止染色，苏木素复染，盐酸酒精分化； 15) 脱水透明封片；
二步法（Envison法） 1) 脱蜡水化； 2) PBS洗3次，各6分钟； 3) 抗原修复； 4) 用蒸馏水配置新鲜的3%H2O2-甲醇室温封闭10分钟； 5) PBS洗3次，各6分钟； 6) 滴加正常山羊血清封闭液,室温20分钟； 7) 甩去多余液体滴加一抗4℃过夜； 8) 37℃复温45分钟； 9) PBS洗3次，各8分钟； 10) 滴加二抗，室温30分钟； 11) PBS洗3次，各8分钟； 12) DAB显色10分钟在显微镜下掌握染色程度； 13) 蒸馏水洗终止染色； 14) 苏木素复染，盐酸酒精分化； 15) 脱水透明封片镜检； 注：上述冲洗步骤切勿直接对着组织冲洗，冲洗时力度要适中，以免组织芯片掉片。
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组织芯片
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